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使用Sigma胶原酶,掌握这几步很重要
  • 发布日期:2019-10-09      浏览次数:26
    •    使用Sigma胶原酶,掌握这几步很重要
        Sigma胶原酶是一种由胶原酶溶组织分泌的酶的混合物,不同产品的成分的相对比例分化10-18中分泌的酶。主要成分是两胶原酶,梭菌,和中性蛋白酶。这些酶的协同作用降解胶原及胶原酶酶和中性蛋白酶是细胞从组织有效释放必要的其他细胞内的材料的作用。
        Sigma胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,配制成为200u/mL就可以了。
        准备样品:干粉,PBS缓冲液,离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。
        准备工作:将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。
        配制:
        1.称=胶原酶:按胶原酶液浓度0.25%用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS(PH到7.2左右)液中。搅拌混匀,置于4℃内12小时。
        2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。
        3.分装:将除菌之后的Sigma胶原酶用移液枪分装。
        Sigma胶原酶的使用:
        1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm左右小块。
        2.将组织块放入离心管(三角烧瓶)中加入30~50倍体积的胶原酶溶液,旋紧盖子(密封烧瓶)。
        3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内,每隔3min振摇一次,如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。消化时间与组织的类别很有关系,对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织,消化时间4~48h,对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min,也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状,一经摇动即成细胞团或单个细胞,可以认为已消化充分。上皮组织经Sigma胶原酶消化后,由于上皮细胞对此酶有耐受性,可能仍有一些细胞团未完全分散,但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长,因此,如无特殊需要可以不必再进一步处理。
        4.收集消化液(有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤),离心1000r/min,5min,去除上清,用无血清培养液离心漂洗1~2次,去除上清,加培养液制成细胞悬液,接种培养瓶。

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