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新乡高服机械股份有限公司invitrogen trizol

更新时间:2019-06-26

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产品特点:invitrogen trizol说明书/价格(货号:15596026)
产品名称:Invitrogen TRIZOL、Trizol Reagent、一步法总RNA提取试剂
品牌:Invitrogen
货号:15596026 (100ML)和15596018(200ML)
产品优点:可快速简单地获得高纯度总RNA
特惠价格:900元/瓶(100ML);1700元/瓶(200ML)

invitrogen trizol的详细资料:

invitrogen trizol说明书:

从细胞中提取总RNA 

1) 培养贴壁细胞:不须消化,可直接用Trizol进行消化、裂解,Trizol体积按10cm2/ml比例加入。 

2) 悬浮细胞可直接收集、裂解,每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞,或107细菌细胞。

从组织中提取总RNA 

invitrogen trizol液氮研磨,组织块直接放入研体中,加入少量液氮,迅速研磨,待组织变软,再加少量液氮, 

再研磨,如此三次,按50-100mg组织/mlTrizol加入Trizol,转移入离心管进行第2步操作。 

2) 匀浆:组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol,另外,组织体积不能超过Trizol体积 

的10%,否则匀浆效果会不好,用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。 

2.细胞或组织加Trizol后,室温放置5min,使其充分裂解。注:此时可放入-70℃长期保持。 

3.12000rpm 离心5min,弃沉淀。 

4.按200ul/ml Trizol加入,振荡混匀15分钟,室温放置15min。注:禁用漩涡振荡器, 

以免基因组DNA断裂。 

5.4℃12000g离心15min。 

6.吸取上层水相,至另一离心管中。 

注:1)千万不要吸取中间界面。 

2)若同时提取DNA和蛋白质,则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA,则弃下层酚相。 

7.按0。5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀,室温放置5-10min。 

8.4℃ 12000g离心10min,弃上清,RNA沉于管底。 

9.按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇,温和振荡离心管,悬浮沉淀。 

10.4℃ 8000g离心5min,尽量弃上清。 

11.室温晾干或真空干燥5-10min。 注:RNA样品不要过于干燥,否则很难溶解。 

12.可用50ul H2O,TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品,55-60℃5-10min。 

注:H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。 

12、测O。D值定量DNA浓度。 

注:1)此方法提取RNA A260/A280值在1。6-1。8之间。 

2) 产率估计:组织标本:(ug RNA/mg组织)1-10ug,培养细胞(ug RNA/106 Cell):5-15ug。 

注:1、组织或细胞量过少,可酌情减少Trizol用量。 

2、组织或细胞用量过多,会引起DNA对RNA的污染。 

3、高蛋白,脂肪或多糖类组织,肌肉组织或块状植物组织等,组织匀浆或液氮研磨 

后须4℃ 1200离心10min去掉不溶物,再进行下面操作,若顶层有脂肪物,则 

也须去掉。 

4、热天提RNA,带手套是必须的,手是RNase的主要来源。 

5、组织块用液氮研磨,效果,若没有液氮或电动匀浆器,可用手动匀浆器代替, 

此时组织块不宜过大,且需先用眼科剪将组织绞碎,然后再充分研磨。

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